在樣本處理完畢后，即可進(jìn)入正式的ELISA檢測步驟。首先，將處理好的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品分別加入預(yù)先包被有白蛋白的96孔板中，每個孔中加入的體積需嚴(yán)格按照說明書操作，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。隨后，輕輕晃動孔板，使樣本或標(biāo)準(zhǔn)品均勻覆蓋孔底，然后置于37℃恒溫箱中孵育一段時間，讓抗體與白蛋白充分結(jié)合。

    孵育結(jié)束后，取出孔板，棄去孔內(nèi)液體，并用洗滌液反復(fù)洗滌數(shù)次，以去除未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)。洗滌完畢后，向每個孔中加入酶標(biāo)二抗，同樣置于37℃恒溫箱中孵育。酶標(biāo)二抗能夠與已結(jié)合在白蛋白上的抗體特異性結(jié)合，為后續(xù)的顯色反應(yīng)做準(zhǔn)備。

    孵育結(jié)束后，再次洗滌孔板，然后加入顯色底物。在酶的作用下，顯色底物會發(fā)生顏色變化，且顏色深淺與樣本中抗白蛋白抗體的含量成正比。因此，通過觀察顏色變化并測定吸光度值，即可間接反映樣本中抗白蛋白抗體的含量。

    最后，使用酶標(biāo)儀在特定波長下測定各孔的吸光度值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過對比樣本的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可計(jì)算出樣本中抗白蛋白抗體的具體濃度。

    整個檢測過程需嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，避免污染和誤差，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。