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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術服務內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

Withaperuvin C  81644-34-0  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  關鍵詞：  酸漿屬; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒  

Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄內(nèi)酯S  分子式：C28H40O8  度：98.0%  關鍵詞：  南非醉茄; 睡茄交酯; 睡茄內(nèi)酯; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒  

Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄內(nèi)酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  關鍵詞：  細胞毒活性; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠載脂蛋白H(Apo-H)ELISA試劑盒  

Wallicoside  88797-59-5  中文名：斷節(jié)參苷  分子式：C61H98O26  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒           

Vildagliptin  274901-16-5  中文名：維達列汀  分子式：C17H25N3O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit
5-Aminosalicylic acid  89-57-6  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3    CLIAKitforATA(HumanAngiotensinaseA)ELISAKit人緊張肽酶A規(guī)格：48T/96T

Norfloxacin  70458-96-7  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3    線粒體復合物V蛋白共沉淀分析試劑盒5次

Indapamide  26807-65-8  中文名：吲達帕胺  分子式：C16H16ClN3O3S    Rabbitadramycin,ADRELISAKit兔阿霉素(ADR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Loperamide hydrochloride  34552-83-5  中文名：鹽酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2    豚鼠Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)ELISA試劑盒 ，英文名： KL-6 ELISA Kit

Nefopam hydrochloride  23327-57-3  中文名：鹽酸奈福泮  分子式：C17H20ClNO    Human pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒
副雞禽桿菌PCR檢測試劑盒直銷蒙脫石（標準品）  Montmorillonit  質(zhì)量規(guī)格：鑒別 人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽(CCK-8)ELISA檢測試劑盒Humancholecystokininoctapeptide,CCK-8ELISAKit 96T/48T

佛手柑素;香檸檬素;佛手柑亭;香檸檬亭（標準品）  Bergamottin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)試劑盒 Rat Nerve growth factor,NGF ELISA kit

鹽酸羅哌卡因（標準品）  Ropivacaine hydrochloride   質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定 英文名稱RatCoisolELISAKit大鼠皮質(zhì)醇(Coisol)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

番石榴苷（標準品）  Guaijaverin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品 活體細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測定試劑盒20

恩曲他濱（標準品）  Emtricitabine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品 ELISAKitPlg人纖溶酶原規(guī)格：48T/96T

恩曲他濱  Emtricitabine  質(zhì)量規(guī)格：>99%,核苷逆轉(zhuǎn)錄酶(NRTI)抑制劑 小鼠肝素蛋白聚糖2(HSPG2)ELISA試劑盒 ，英文名： HSPG2 ELISA Kit

肌酐（標準品）  Creatinine  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 人神經(jīng)降壓素()ELISA檢測試劑盒HumanNeurotensin,ELISAKit 96T/48T

雙氯芬酸鉀（標準品）  Diclofenac Potassium  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 大鼠血紅蛋白(HbCO)試劑盒 Rat Carboxyhemoglobin,HbCO ELISA Kit

依西美坦（標準品）  Exemestane  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 英文名稱MMP-1金屬基質(zhì)蛋白酶-1規(guī)格：96T/48T

鹽酸曲美他嗪（標準品）  Trimetazidine Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20
N-乙酰磺胺甲惡唑  N-Acetyl Sulfamethoxazole  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatAngiogeninELISAKit大鼠生長素(Angiogenin)規(guī)格：96T/48T

磺胺甲惡唑 β-D-葡萄糖苷酸  Sulfamethoxazole β-D-Glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatAngiopoietin-2ELISAKit大鼠生成素-2(ANG-2)規(guī)格：96T/48T

頭孢匹羅  Cefpirome  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatAngiopoietin-2ELISAKit大鼠生成素-2(ANG-2)規(guī)格：96T/48T

阿米舒必利-d5  Amisulpride-d5  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatangiotensinogenELISAKit大鼠緊張素原(aGT)規(guī)格：96T/48T

美羅培南碳酸鈉  Meropenem with  carbonate  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatangiotensinogenELISAKit大鼠緊張素原(aGT)規(guī)格：96T/48T

美羅培南鈉鹽  Meropenem  Salt  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatangiotensionIELISAKit大鼠緊張素I(AngI)規(guī)格：96T/48T

6,8-二甲氧基莫西沙星鹽酸鹽  6,8-Dimethoxy Moxifloxacin Hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatangiotensionIELISAKit大鼠緊張素I(AngI)規(guī)格：96T/48T

8-乙氧基莫西沙星  8-Ethoxy Moxifloxacin  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatansferrieceptorELISAKit大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)規(guī)格：96T/48T

8-去甲氧基-8-氟莫西沙星  8-Desmethoxy-8-fluoro Moxifloxacin  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatansferrieceptorELISAKit大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)規(guī)格：96T/48T

外消旋順式-莫西沙星?；?/span>-β-D-葡萄糖苷酸  rac cis-Moxifloxacin Acyl-β-D-glucuronide  質(zhì)量規(guī)格：美國進口 英文名稱RatAquaporin0ELISAKit大鼠水通道蛋白0(AQP0)規(guī)格：96T/48T
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。