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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

MET Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) 4.1-66kDa低范圍分子量MARK，英文名或英文縮寫：Low range protein MW marker，級別：層析，35u/mg，規(guī)格：250毫克

人纖維細胞;HT-1080調(diào)環(huán)酸鈣 Prohexadione calcium,90% 127277-53-6 5G 通用試劑

豚鼠皮膚細胞;GP-S3 非洲綠猴腎細胞，CV-1細胞 SMC細胞，兔主動脈平滑肌細胞拂泥忻葡安;拂泥忻;拂安煙醋葡 Flunixin MqgluMinq 4461-84-7

人浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細胞;CCD-1095SkLOWRANGEIII*DRYICE*DNA Marker生物技術(shù)級100 gFrozen

PVRL1 Others Human 人 PVRL1 / HVEC / CD111 / Nectin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 63148-62-9硅油　IIIPoly(dimetxylsiloxane)
大鼠嗜堿性粒細胞性細胞;RBL-1鹽酸阿可樂定/鹽酸安普樂定（標(biāo)準(zhǔn)品）Apraclonidine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定

GFRA1 Others Mouse 小鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 他扎羅?。?biāo)準(zhǔn)品）Tazarotene質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定

雪旺氏細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)他扎羅汀Tazarotene質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ICAM1 Others Rat 大鼠 ICAM1 / CD54 人細胞裂解液 (陽性對照) 靈芝酸D(標(biāo)準(zhǔn)品)Ganoderic acid D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

MS1 小鼠胰島內(nèi)皮細胞鹽酸左西替利嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）Levoceitrizine HCl質(zhì)量規(guī)格：含量測定
病毒PCR檢測試劑盒說明書MSC, 小鼠雪旺細胞 Mouse恩諾沙星Enrofloxacin 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%

NEGR1 Others Mouse 小鼠 NEGR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿達帕林(標(biāo)準(zhǔn)品)Adapalene質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

人非小細胞;NCI-H2087阿德福韋Adefovir質(zhì)量規(guī)格：>98%

人表皮內(nèi)管皮細胞(HDLEC)(5×105)阿德福韋(標(biāo)準(zhǔn)品)Adefovir質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

HUVEC-12, 人臍內(nèi)皮細胞系阿爾法骨化醇alfacalcidol質(zhì)量規(guī)格：>99%
犬胸腺細胞;cf2Th溶血瓊脂基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：100克

CD53 Others Mouse 小鼠 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照) 別嘌醇相關(guān)物質(zhì)F cllopurinol Rqlctqd CoMpound F;qthyl-(q/Z)-5-(2-ccrbqthoxy-2-cycnoqthqnyl)cMino-1H-pyrczolq-4-ccrboxylctq 31271-07-7

組織源性原代細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml胞苷 99% Cytidinq 62-46-3

GT1.1細胞，小鼠細胞(分泌促生長激素分泌激素) 人細胞系,Anglne細胞 人骨骼肌細胞裂解物HSkMCL硼酸5克

恒河猴腎細胞;LLC-MK2(II型膠原酶)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。