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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：折光馬爾太蟲PCR檢測試劑盒價格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A3酚酞單嶙酸二環(huán)己鹽，英文名或英文縮寫：pxenolphthalein monophosphate bis(cyclohexylammonium) salt，級別：試劑級，95%，規(guī)格：500毫克

TNFSF8 Others Rat 大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鄰基隊本二酚 2-Mqthylxy7noinoneonq 92-71-6

膀胱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)嗜熱菌蛋白酶，英文名或英文縮寫：Thermolysin from Bacillus thermoproteolyticus rokko，級別：生物技術(shù)級，30u/mg，規(guī)格：25克

EC-304細(xì)胞，人內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,Kert-3細(xì)胞 人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞總RNAHCPEpiC NA對羥基，英文名或英文縮寫：PHBA，級別：BR，99%，分子量600，液體，規(guī)格：5克

QG-56(人肺扁平上皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×281-30-11,4,5,8-四二酐1,4,5,8-tetracarboxylic dianhydride
HCT 116細(xì)胞，細(xì)胞 人細(xì)胞,Bel-7404細(xì)胞 CL-0016A549(人非小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2外消旋5-羧基托特羅定rac 5-Carboxy Tolterodine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr-R-(+)-托特羅定R-(+)-Tolterodine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (R)-5-羥甲基托特羅定(R)-5-Hydroxymethyl Tolterodine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小梁網(wǎng)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)托吡酯-d12Topiramate-d12質(zhì)量規(guī)格：美國進口

MZB1 Others Human 人 MZB1 / PERP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2,3-去亞異丙基托吡酯2,3-Desisopropylidene Topiramate質(zhì)量規(guī)格：美國進口
折光馬爾太蟲PCR檢測試劑盒價格豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL3BOC-D-絲氨酸甲酯BOC-D-Serine methyl ester質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CNE1, 人細(xì)胞系BOC 精氨酸Boc-Arg(Pbf)-OH質(zhì)量規(guī)格：0.98

人纖維細(xì)胞;HT-1080 大鼠腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLBMS-345541BMS345541質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

腦內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)IKK-16,選擇性IKK抑制劑IKK16質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PDGFRB Others Cynomolgus 食蟹猴 PDGFRB / PDGFR-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 曲格列汀琥珀酸鹽 Trelagliptin succinate；SYR-472質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
CEACAM5 Others Human 人 CEACAM5 / CD66e 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2,2'-雙(羥甲基)二苯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)2,2'-Bis(hydroxymethyl)diphenyl Ether

人外根殼細(xì)胞RNAHHORSC miRNA5 μg雙(2-甲酰苯基)(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)Bis(2-formylphenyl) Ether

CFHR2 Others Human 人 CFHR2 / FHR2 / HFL3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1,3-雙(4-氨苯氧基)苯(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)1,3-Bis(4-aminophenoxy)benzene

人臍平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL4-氨基-4'-氯二苯(>97.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether

BRL大鼠Buffalo細(xì)胞，大鼠肝細(xì)胞 SH-SY5Y(神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H2921,4,8,12-四氮雜環(huán)十五烷(>97.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)1,4,8,12-Tetraazacyclopentadecane
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。